近年来，斑马鱼Crispant技术在基因编辑领域取得了重要突破，凭借其高效性、低成本和易操作性，成为了疾病机制研究、药物筛选以及功能基因组学的理想工具。未来，这项技术有望在精准医疗中发挥更大潜力。

Crispant的定义是通过CRISPR/Cas9技术，将Cas9蛋白和靶点gRNA混合（RNP）注射到斑马鱼的1细胞期，获得F0代的敲除嵌合体斑马鱼（整体敲降），并直接用于表型观察和基因功能研究。这项技术相较于传统的m啡啉介导基因敲降技术，展现出如下优势：

优势一：缩短研究周期

Crispant技术可在最短2周内观察到胚胎期表型，通常在4周内提供包括靶点效率验证的完整研究报告，大幅度缩短了研究时间。

优势二：随时观察表型

该技术可在斑马鱼发育的任何阶段观察表型，因其在基因组水平进行基因编辑，导致目的基因在基因组层面产生移码突变或蛋白翻译提前终止，从而实现基因敲降，其效果持续，从胚胎阶段到成年期均可观察到表型变化。

优势三：低毒副作用

相较于m啡啉，Crispant体系的毒副作用较低，能够一次性设计并筛选多个高效且特异的靶点，不同靶点的表型可相互验证，且可以共同注射多个靶点以实现基因的完全敲除效果。

优势四：同时敲降多个基因

Crispant技术能够针对多个基因同时进行敲降，避免了同时注射多个m啡啉所导致的胚胎致死或非特异性表型的问题。

优势五：便于后续稳定品系构建

Crispant技术所获得的靶点可直接用于稳定敲除斑马鱼品系的构建，节省了时间和费用。

应用场景

通过多重sgRNA协同编辑和F0代表型直接筛选，Crispant技术将基因功能研究的周期压缩至传统方法的1/5，成本降低50%以上。这使得Crispant技术成为疾病模型构建、基因功能解析及药物筛选的理想选择。

疾病模型构建

已有研究利用Crispant技术构建癫痫模型，通过敲除irf2bpl或cars2基因，模拟患者的抽搐表型，以用于抗癫痫药物的筛选。此外，该技术也被应用于凝血障碍模型构建，通过敲除adcyap1b基因导致凝血因子下调，适用于抗血栓药物的评价。

基因功能解析

研究还利用Crispant技术，通过敲除kctd10基因诱导心脏线性畸形，推动心脏发育的研究，也有通过rfx6敲除诱导糖尿病样表型，推进胰腺功能的研究。

药物筛选

Crispant技术还通过敲除斑马鱼的cars2、Sigirr、cbsb基因等诱发相关表型，成为神经系统疾病、抗感染与免疫调节、代谢与罕见病、肿瘤个性化等药物筛选的重要手段。

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